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本制品是一种快速、高效、便捷的基于SYTOX Green特异地对死细胞或固定并通透后的细胞或组织样品的细胞核进行染色的染色液。本染色液中含有RNase A等核糖核酸酶，能有效消除SYTOX Green对于样品中RNA的染色，使细胞核染色效果更好。

本染色液中包含DNase-free的RNase A等核糖核酸酶，可直接加入到经固定、通透处理后细的胞或组织切片样品上使用，孵育时间为15～30分钟。

SYTOX Green是一种非细胞膜渗透性的花菁荧光染料，不能穿过具有生物活性的细胞质膜，只能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋形成SYTOX Green-DNA复合物，荧光强度增加500倍以上，从而产生明亮的绿色荧光，因此SYTOX Green仅对死细胞染色，被用来区分正常细胞与坏死细胞。SYTOX Green对具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞的细胞核染色时需固定和通透处理，然后才能染色。由于SYTOX Green结合DNA的同时也可以结合RNA，所以对细胞核染色时，还需要酌情使用RNase A等先去除RNA，使SYTOX Green仅对DNA染色，从而用于细胞核的染色。

对于组织切片，按照每个组织需要50μL染色液计算，每100mL染色液可以检测2000个组织切片样品。对于细胞样品，按照96孔板中的样品每孔使用100μL染色液计算，每100mL染色液可以检测1000个样品；按照6孔板中的样品每孔使用1mL染色液计算，每100mL染色液可以检测100个样品。

• 本制品为荧光染料，首次使用时可以根据需要适当进行分装，尽量避免反复冻融，操作时请注意避光。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 固定和通透(选做)：
  如果希望独有所有细胞的细胞核都进行染色，须执行本步骤；如果仅希望染色死细胞请忽略本步骤。
  
  • 使用PBS清洗细胞/切片1～2遍，每次1分钟。
    
  • 使用4%多聚甲醛固定液或免疫染色固定液对细胞进行固定，室温固定10～15分钟。
    
  • 吸除固定液，用PBS或免疫染色洗涤液洗涤细胞2～3遍，每次1～3分钟。
    
  • 使用免疫染色通透液(含Triton X-100)或配制在PBS中的0.5% Triton X-100 进行通透，室温5分钟。然后用PBS或免疫染色洗涤液洗涤细胞2～3遍，每次1～3分钟。
    
  • 随后如果需要进行免疫荧光染色，按照免疫荧光染色的方法先进行抗体的孵育或用其它染料进行染色。免疫荧光染色完毕后再按步骤2开始进行固定、通透即后续的细胞核染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行细胞核染色。
• 染色：
  
  • 对于贴壁细胞或组织切片，加入适当体积的细胞核绿色荧光染色液(SYTOX Green)，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞或样品。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的细胞核绿色荧光染色液(SYTOX Green)，混匀。
    
  • 室温避光孵育15～30分钟，以20分钟为初始孵育时间，后续可以根据实际染色效果对染色时间进行适当调整和优化，以得到更加理想的染色效果。
    
  • 对于贴壁细胞或组织切片，吸除细胞核绿色荧光染色液(SYTOX Green)，用PBS或免疫染色洗涤液洗涤2～3次，每次1～3分钟。对于悬浮细胞，1000×g离心5分钟，小心吸除上清液，缓慢加入PBS重悬细胞。重复前述的离心、去除上清和PBS重悬的洗涤步骤2次，将细胞滴加至孔板、细胞培养皿或者细胞爬片上。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。

• 使用本染色液染色L-929细胞中细胞核的效果请参考图2。
  
  
  
  图2.SYTOX Green染色L-929细胞中细胞核的效果。图A为L-929细胞在明场下的形态图；图B的绿色荧光为SYTOX Green染色的细胞核。
  
  • 细胞经固定和通透处理后再使用本制品进行了染色。
    
  • 实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
  
  
• 使用本染色液染色大鼠坐骨神经冷冻切片细胞核的效果请参考图3。
  
  
  
  图3.SYTOX Green染色大鼠坐骨神经冰冻切片细胞核的效果。图A为大鼠坐骨神经在明场下的形态图；图B的绿色荧光为SYTOX Green染色的细胞核；图C的蓝色荧光为DAPI染色的细胞核。
  
  • 实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。